13.2 Plasmids

返回总讲义：CHEM10712 slides 知识点整理与讲解
知识点索引：CHEM10712 知识点索引
上级章节：13. Recombinant proteins 与 genome editing
导航：上一节：13.1 Applications；下一节：13.3 E. coli transformation

详细内容

Plasmid：

small circular double-stranded DNA。
常见于 bacteria。
与 chromosomal DNA 分离。
可 independently replicate。
大小常约 1-10 kbp。

主要 features：

ORI：origin of replication，允许 host 复制 plasmid。
antibiotic selection marker，例如 amp resistance。
GOI：gene of interest。
promoter、RBS、terminator 等 expression/regulation elements。

深入讲解

plasmid 是 cloning/expression 的载体。ORI 决定 plasmid 能在 host 中复制；selection marker 让只有携带 plasmid 的细胞能在 antibiotic 中生长；GOI 和 regulatory elements 决定是否以及如何表达目标蛋白。

expression plasmid 与 cloning plasmid 的重点不同。cloning 更强调复制和筛选；expression 还必须有 promoter、RBS/translation signals、terminator，有时还有 tag、signal peptide 或 inducible control。

原文小点逐条解释

原文小点： small circular double-stranded DNA。
- 讲解： 这个小点是 plasmid 的功能模块。判断它的作用时要问：它负责复制、筛选、表达、调控，还是编码目标序列。
原文小点： 常见于 bacteria。
- 讲解： 这个小点是 plasmid 的功能模块。判断它的作用时要问：它负责复制、筛选、表达、调控，还是编码目标序列。
原文小点： 与 chromosomal DNA 分离。
- 讲解： 这个小点是 plasmid 的功能模块。判断它的作用时要问：它负责复制、筛选、表达、调控，还是编码目标序列。
原文小点： 可 independently replicate。
- 讲解： 这个小点是 plasmid 的功能模块。判断它的作用时要问：它负责复制、筛选、表达、调控，还是编码目标序列。
原文小点： 大小常约 1-10 kbp。
- 讲解： 这个小点是 plasmid 的功能模块。判断它的作用时要问：它负责复制、筛选、表达、调控，还是编码目标序列。
原文小点： ORI：origin of replication，允许 host 复制 plasmid。
- 讲解： 这个小点是 plasmid 的功能模块。判断它的作用时要问：它负责复制、筛选、表达、调控，还是编码目标序列。
原文小点： antibiotic selection marker，例如 amp resistance。
- 讲解： 这个小点是 plasmid 的功能模块。判断它的作用时要问：它负责复制、筛选、表达、调控，还是编码目标序列。
原文小点： GOI：gene of interest。
- 讲解： 这个小点是 plasmid 的功能模块。判断它的作用时要问：它负责复制、筛选、表达、调控，还是编码目标序列。
原文小点： promoter、RBS、terminator 等 expression/regulation elements。
- 讲解： 这个小点是 plasmid 的功能模块。判断它的作用时要问：它负责复制、筛选、表达、调控，还是编码目标序列。

做题和复习时怎么用

描述 plasmid components 时写 ORI, selectable marker, GOI, promoter/RBS/terminator。每个 component 必须附功能，不要只列名词。

常见误区

只列应用或工具名称，不说明 vector、host、selection marker、expression element 或 editing component 的具体功能。
把 recombinant protein expression 和 genome editing 混为一谈；前者主要表达目标产物，后者改变 genome sequence。