16.6 PCR/primer 题
- 返回总讲义：CHEM10712 slides 知识点整理与讲解
- 知识点索引：CHEM10712 知识点索引
- 上级章节：16. 常见考试/答题模式
- 导航：上一节：16.5 Enzyme mechanism 题；下一节：16.7 Recombinant protein production 题
步骤：
- 确认 target sequence 方向。
- forward primer 取目标 5’ 端序列，写 5’->3’。
- reverse primer 取目标 3’ 端的 reverse complement，写 5’->3’。
- 用 Tm = 2(A+T)+4(G+C) 粗略估算。
- 检查两个 primers Tm 是否相近。
PCR primer 题本质上是方向性和互补性。polymerase 只能从 primer 3’-OH 延伸，所以 primers 必须夹住目标区，并且它们的 3’ ends 指向彼此。
reverse primer 最常错：它不是直接复制目标末端，而是目标另一条链对应区域的 reverse complement。所有 primer 序列最终都写 5’ 到 3’。
做题和复习时怎么用
Section titled “做题和复习时怎么用”画出双链和 5’/3’ 箭头，forward 放左端，reverse 放右端并取 reverse complement；再算 Tm 并检查两者接近。
- 只背定义，不解释结构如何导致功能。
- 答题时缺少“因为…所以…”的因果链。