12.1 PCR 原理

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详细内容

PCR 用 primers 和 DNA polymerase 扩增目标 DNA。

基本循环：

1. Denaturation：双链 DNA 分开。
2. Annealing：primers 与 template 互补结合。
3. Extension：polymerase 从 primer 3’-OH 延伸新链。

深入讲解

PCR 是体外复制特定 DNA region 的方法。两个 primers 定义扩增边界；DNA polymerase 从 primer 的 3’-OH 开始延伸；每轮 denaturation/annealing/extension 理论上使 target copy number 翻倍。

PCR 的 specificity 来自 primer binding。如果 primers 设计不好，可能扩增非目标区域、形成 primer dimers，或因 Tm 不匹配导致效率低。

做题和复习时怎么用

描述 PCR cycle 时写 denaturation separates strands, annealing primers bind, extension polymerase synthesizes DNA 5’->3’.

常见误区

• 忘记 nucleic acid 和 primer 都按 5->3 方向书写。
• 只列工具名称，不说明每个 DNA element 或 enzyme 的功能。

关联知识点

• gene features
• transformation